• page_banner

Haberler

Javascript şu anda tarayıcınızda devre dışı.JavaScript devre dışı bırakıldığında bu web sitesinin bazı özellikleri çalışmayacaktır.
Özel bilgileriniz ve ilgilendiğiniz özel ilaçla kaydolun, sağladığınız bilgileri kapsamlı veritabanımızdaki makalelerle eşleştirelim ve size hemen bir PDF kopyasını e-posta ile gönderelim.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Bulaşıcı Hastalıklar Departmanı, Suzhou Üniversitesi Birinci Bağlı Hastanesi, Suzhou Şehri, Jiangsu Eyaleti, 215000 Tel.5 yıllık genel sağ kalımı %14.1 olan sindirim sistemi tümörleri.HCC'li birçok hasta ileri bir aşamada teşhis edilir, bu nedenle HCC'den mortaliteyi azaltmak için erken tarama esastır.Serum alfa-fetoprotein (AFP), lens lektin-reaktif alfa-fetoprotein (AFP-L3) ve anormal protrombin (K vitamini eksikliği kaynaklı protein II, PIVKA-II) gibi yaygın olarak kullanılan saptama göstergelerine ek olarak, sıvı biyopsi teknikleri HCC'nin saptanmasında tanısal değeri olduğu gösterilmiştir.İnvaziv prosedürlerle karşılaştırıldığında, sıvı biyopsisi dolaşımdaki malign metabolitleri tespit edebilir.Sıvı biyopsi teknikleri, dolaşımdaki tümör hücrelerini, dolaşımdaki tümör DNA'sını, dolaşımdaki RNA'yı ve eksozomları saptar ve HCC'nin erken taraması, teşhisi ve prognostik değerlendirmesi için kullanılır.Bu makale, yüksek riskli HCC gruplarının erken taranmasını iyileştirmek için HCC'nin erken değerlendirilmesi için uygun seçenekler olabilecek umut verici biyobelirteçleri izole etmek için çeşitli sıvı biyopsi tekniklerinin moleküler biyolojisini ve uygulamasını gözden geçirmektedir.Anahtar Kelimeler: sıvı biyopsi tekniği, hepatosellüler karsinom, yüksek risk grubu.
Hepatoselüler karsinom (HCC), sindirim sisteminin yaygın bir malign tümörüdür ve hem erkeklerde hem de kadınlarda yeni malign tümör vakaları arasında altıncı sıradadır.1 Dünya çapında, karaciğer kanseri, akciğer ve kolorektal kanserden sonra kansere bağlı ölümlerin üçüncü önde gelen nedenidir ve tüm malign neoplazmlardan kansere bağlı ölümlerin %8.3'ünü oluşturur.1 HCC'nin prognozu, tanı anındaki evre ile yakından ilişkilidir.HCC'de kötü sağkalımın ana nedenleri intrahepatik metastazlar, portal ven tümör trombüsleri ve rezeksiyona izin vermeyen uzak metastazlardır ve bu özelliklerin çoğu tanı anında hastalarda zaten mevcuttur.
Tanı ve tedavi kılavuzlarına göre, HCC gelişimi için ana risk faktörleri karaciğer sirozu, kronik hepatit B virüsü (HBV) veya hepatit C virüsü (HCV) enfeksiyonu, alkolik yağlı karaciğer hastalığı ve alkolsüz yağlı karaciğer hastalığıdır (NAFLD). ).2 Ek olarak, HCC için risk faktörleri arasında aflatoksinle kontamine gıda alımı, şistozomiyaz, sirozun diğer nedenleri, ailede karaciğer kanseri öyküsü, diyabet, obezite, sigara ve ilaca bağlı karaciğer hasarı bulunur.35 ve 45 yaşındaki yüksek risk gruplarında düzenli sağlık kontrolleri yapılmalıdır.Erken tarama, HCC'li hastaların genel sağkalımını iyileştirmek için önemli bir erken tedavi stratejisidir.
HCC3,4'ün erken taranması için AFP, AFP-L3 ve PIVKA-II gibi biyobelirteçler önerilir.Likit biyopsi teknikleri erken tanı ve tedavi değerlendirmesinde umut verici sonuçlar göstermiştir.5,6 AFP gibi yaygın olarak kullanılan serum belirteçlerinden daha yüksek duyarlılık ve özgüllüğe sahip olabilen HCC sıvı biyopsisinde önemli ilerleme kaydedilmiştir (Tablo 1).
AFP, HCC'de yaygın olarak kullanılan bir biyobelirteçtir ve şu anda hastalığın erken taraması, teşhisi ve değerlendirilmesi için yaygın olarak kullanılan en ayrıntılı biyobelirteçtir.Sürekli olarak yükselmiş bir AFP seviyesi, HCC'nin ilerlemesi için bir risk faktörü olarak kabul edilir.7,8 Küçük hepatoselüler karsinomun (sHCC) saptanma oranı, ultrason ve bilgisayarlı tomografinin gelişmesiyle artmaktadır ve AFP'nin klinik uygulamada hHCC'nin saptanmasına karşı özellikle duyarsız olduğu bulunmuştur.Geriye dönük çok merkezli bir çalışmaya göre9, HCC vakalarının %46'sında (616/1338) ve sHCC vakalarının %23.4'ünde (150/641) AFP pozitif bulundu.Ek olarak, kronik karaciğer hastalığı ve sirozu olan hastalarda AFP seviyeleri yükselir.10 Bu nedenle, AFP'nin sHCC için sınırlı bir tarama etkisi vardır.11 Hepatoselüler Karsinom için Asya-Pasifik Klinik Uygulama Kılavuzlarına göre, AFP kullanımı önerilmemektedir.12 Klinik kanıtlar, HCC tedavisinde PIVKA-II'nin AFP'ye göre daha üstün olduğunu ve PIVKA-II ile AFP kombinasyonunun HCC'de daha yüksek bir tanı değeri.13 Doku biyopsisi ile karşılaştırıldığında, sıvı biyopsisi öncelikle vücut sıvılarındaki (kan, tükürük, plevral sıvı, beyin omurilik sıvısı veya idrar) tümörle ilişkili metabolitleri saptar ve dokulara daha az invazivdir.14 Ek olarak, sıvı biyopsiler, primer tümör dokusunda bulunmayan malign özellikleri yansıtabilir.15 Sıvı biyopsiler henüz tüm tümör tipleri için klinik uygulamada test edilmemektedir, ancak kanserdeki tanısal potansiyelleri onkologların dikkatini çekmektedir.16 Sıvı biyopsisi, dolaşımdaki tümör hücrelerini (CTC'ler), dolaşımdaki tümör DNA'sını (cDNA), dolaşımdaki serbest RNA'yı (ecRNA) ve eksozomları saptayabilir.Bu yazıda, yüksek riskli HCC gruplarının erken taranmasında çeşitli sıvı biyopsi tekniklerinin özelliklerini, rolünü ve uygulamasını tartışacağız.
Sağlıklı bireylerden alınan kan örneklerinde hücre dışı DNA (cfDNA) ilk olarak 1948'de Mandel ve ark.17 cfDNA, esas olarak lenfositlerden ve miyeloid hücrelerden kaynaklanan, yaklaşık 160-180 bp uzunluğunda hücresiz bir DNA parçasıdır.ctDNA, tümör hücreleri tarafından periferik kana salınan ve nekroz, apoptoz ve atılım dahil olmak üzere belirli patofizyolojik süreçlerden sonra tümör hücrelerinin genomik bilgisini temsil eden spesifik bir mutant DNA parçasıdır.Toplam cfDNA'daki ctDNA oranı, tümör tipine göre büyük ölçüde değişir ve cDNA fragmanlarının tipik olarak 167 bp'den az uzunlukta olduğu rapor edilir.18 Underhill'in çalışması, cfDNA fragmanlarının genellikle normal cfDNA'dan daha kısa olduğunu göstermiştir.19 Sağlıklı bireylerle karşılaştırıldığında, kanser hastalarının kanındaki cfDNA fragmanlarının toplam uzunluğu daha kısadır, bu nedenle cfDNA, erken tümör taramasının bir göstergesi olarak kullanılabilir.cfDNA fragman uzunluklarının belirli alt kümelerinin zenginleştirilmesi, metastatik olmayan katı tümörlerle bağlantılı cDNA'nın saptanmasını iyileştirebilir.Çalışmalar, ctDNA'nın ilerlemiş pankreas, kolon, mesane, gastrointestinal, karaciğer, yumurtalık, meme, melanom ve baş ve boyun kanserlerinin %75'inden fazlasında bulunduğunu göstermiştir.20,21 Ancak kandaki ctDNA miktarı tümörün konumuna bağlıdır.22 Bettegoud tarafından yapılan bir çalışmada kolorektal, meme, karaciğer, akciğer ve prostat kanserli hastaların kanlarında diğer kanserlere göre daha yüksek cDNA seviyeleri olduğu bulunmuştur.Buna karşılık, ağız kanseri, pankreas kanseri, mide kanseri ve glioma hastalarında kandaki cDNA konsantrasyonu daha düşüktü.yirmi bir
ctDNA, birincil tümör hücreleriyle aynı genetik mutasyonları içerdiğinden, cDNA, metilasyon, hidroksimetilasyon, tek nükleotid varyasyonları ve kopya sayısı varyasyonları dahil olmak üzere heterojen tümöre özgü mutasyonları ve epigenetik değişiklikleri tespit etmek için kullanılabilir.yirmi üç
DNA metilasyonu, gen baskısı ile sonuçlanan en yaygın epigenetik değişikliklerden biridir.Normal hücrelerle karşılaştırıldığında, tümör hücresi genomunun genel metilasyon seviyesinde, özellikle de tümör baskılayıcı genlerin metilasyonunda, erken bir aşamada tespit edilebilen farklılıklar vardır, bu da DNA metilasyonundaki değişikliklerin erken bir indikatör olabileceğini düşündürür. tümörijenez tespiti.HCC ile ilişkili tümör baskılayıcı genler, promotör metilasyonu ile inaktive edilebilir, böylece tümörijenezi uyarabilir.24 DNA metilasyonu, doku spesifikliği, saptanabilirliği ve yaştan bağımsız olması nedeniyle tümörlerin erken teşhisi için ideal bir belirteçtir.Ek olarak, DNA metilasyonu somatik mutasyonlara kıyasla daha yaygındır çünkü hedef genomun her bölgesinde daha fazla hedef bölge ve birkaç değiştirilmiş CpG bölgesi vardır.25 Çoklu CpG bölgelerine ek olarak, DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 ve RGS10.26'da ctDNA'da çok sayıda bağımsız hipermetile lokus tanımlanmıştır.1098 HCC hastası ve 835 sağlıklı kontrolden alınan cfDNA örneklerinin karşılaştırılması, HCC ile ilişkili genlerin karşılık gelen plazma cDNA metilasyon imzalarıyla güçlü bir şekilde ilişkili olduğu bulundu.25 Laboratuar analizine dayalı olarak, sırasıyla %85.7 ve %94,3 duyarlılık ve özgüllük ile 10 metilasyon belirteci içeren bir öngörücü model geliştirildi ve bu belirteçler, tümör kütlesi, tümör evresi ve tedaviye yanıt ile yüksek oranda ilişkiliydi.Bu sonuçlar, cDNA metilasyon belirteçlerinin kullanımının HCC'nin teşhisi, izlenmesi ve prognozunda büyük umut vaat ettiğini göstermektedir.Lu ve diğerleri27 tarafından sunulan üç anormal şekilde metillenmiş genden (APC, COX2, RASSF1A) ve bir miRNA'dan (miR203) oluşan bir metilasyon modelinde, HBV ile ilişkili HCC teşhisi için model 27'nin duyarlılığı ve özgüllüğü karşılaştırılabilirdi.%80.Ayrıca model, AFP düzeyi 20 ng/mL olan tanı konmamış HCC hastalarının %75'ini saptayabilir.Ras ile ilişkili alan ailesi 1A proteini (RASSF1A) için gen, insan genomundaki ana tekrarlayan DNA dizisidir.Araujo et al.RASSF1A promotörünün hipermetilasyonunun, HCC'nin erken taranması için değerli bir biyobelirteç ve epigenetik tedavi için potansiyel bir moleküler hedef olabileceği sonucuna varmıştır.28 Bir çalışmada, HCC'li hastaların %73.3'ünde serum RASSF1A promotör hipermetilasyonu bulundu.29 Uzun serpiştirilmiş nükleotid element 1 (LINE-1), bir başka oldukça aktif retrotranspozisyon aracısıdır.HCC serum örneklerinin %66.7'sinin DNA'sında LINE-1 hipometilasyonu bulundu ve radikal rezeksiyondan sonra erken nüks ve kötü sağkalım ile ilişkilendirildi.29 Hipermetilasyon, karaciğer sirozu ve HCC gelişiminde benzersiz bir rol oynayan yaygın bir genetik süreçtir.30 Buna karşılık, hidroksimetilasyon, gen reaktivasyonunu ve ekspresyonunu indükleyen bir demetilasyon işlemidir ve bu işlemde 5-hidroksimetilsitozin (5-hmC) ürününün tespiti bir tümörü tanımlamak için kullanılabilir.cDNA'nın metilasyonu ve hidroksimetilasyonu, tümörijenez ile ilişkilidir ve HCC'nin erken taranmasına katkıda bulunabilir.2554 denekten oluşan bir çalışmada, cfDNA örneklerinde 31 genom çapında 5-hmC bulundu ve HCC hastalarında ve kronik hastalıkları olanlar gibi yüksek risk gruplarında 5-hmC dizileri karşılaştırılarak 32 gen tanımlandı.Karaciğer hastalıklarının tanı modelleri.ve siroz.Bu model, HCC'yi tümör olmayan dokudan ayırmada AFP'den üstündü.
Kodlama bölgelerindeki mutasyonlar, protein dizilerinde değişikliklere ve nihayetinde kansere yol açabilen transkripsiyonel anormalliklere yol açabilir.Tek nükleotid varyantları, yüksek doku güvenilirliği ve yüksek tümör ve doku özgüllüğü nedeniyle erken tümör taraması için önemli genomik belirteçlerdir.Ekzom ve kanserin tüm genom dizilimi için yeni nesil dizilemeyi (NGS) kullanan çok sayıda HCC ile ilgili çalışma, TP53 ve CTNNB1 gibi ortak mutasyona uğramış hücresel genlerin yanı sıra ARID1A, MLL, IRF2 dahil olmak üzere birkaçını tanımlamıştır.Yeni genler, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 ve JAK1 orta düzeyde mutasyon oranları göstermektedir. Mutant gen fonksiyon analizi, kromatin yeniden şekillenmesinde, Wnt/β-katenin ve JAK/STAT sinyal iletiminde, P53 hücre döngüsü yolunda, epigenetik değiştiricilerde, oksidatif stres yollarında, PI3K/AKT/MTOR yolunda ve RAS/RAF/ MAPK kinaz yolu, HCC onkogenezinde çok önemli roller oynar.32,33 Tümörle ilişkili mutasyonların tespit edildiği bir çalışmada, Huang ve arkadaşları, ctDNA'ya bağlı tümörle ilişkili mutasyonların sıklığının %19,5 ve özgüllüğün %90 olduğunu buldu. .34 Ek olarak, vasküler invazyon yaşayan hastaların ctDNA mutasyonlarına sahip olma olasılığı daha yüksekti (P=0.041) ve daha kısa nükssüz sağkalım (P<0.001). Mutant gen fonksiyon analizi, kromatin yeniden şekillenmesinde, Wnt/β-katenin ve JAK/STAT sinyal iletiminde, P53 hücre döngüsü yolunda, epigenetik değiştiricilerde, oksidatif stres yollarında, PI3K/AKT/MTOR yolunda ve RAS/RAF/ MAPK kinaz yolu, HCC onkogenezinde çok önemli roller oynar.32,33 Tümörle ilişkili mutasyonların tespit edildiği bir çalışmada, Huang ve arkadaşları, ctDNA'ya bağlı tümörle ilişkili mutasyonların sıklığının %19,5 ve özgüllüğün %90 olduğunu buldu. .34 Ek olarak, vasküler invazyon yaşayan hastaların ctDNA mutasyonlarına sahip olma olasılığı daha yüksekti (P=0.041) ve daha kısa nükssüz sağkalım (P<0.001).Mutant gen fonksiyon analizi, kromatin yeniden şekillenmesi, Wnt/β-katenin ve JAK/STAT sinyalizasyonu, P53 hücre döngüsü yolu, epigenetik değiştiriciler, oksidatif stres yolları, PI3K/AKT/MTOR yolu ve RAS/RAF/MAPK kinaz yolu oynamalarındaki değişikliklerin HCC tümör oluşumunda kritik bir rol.32,33 Tümörle ilişkili mutasyonları bulan bir çalışmada, Huang ve ark.ctDNA'ya bağımlı tümörle ilişkili mutasyonların sıklığının %19.5 ve özgüllüğün %90 olduğunu buldu..34 Кроме того, у пациентов с сосудистой инвазией саще встречались мутации цДНК (P=0,041) у пациентов с сосудистой инвазией саще встречались мутации цДНК (P=0,041) и белересудотие белересеворя кор .34 Ek olarak, vasküler invazyonu olan hastalarda daha fazla cDNA mutasyonu (P=0.041) ve daha kısa hastalıksız sağkalım (P<0.001) vardı.Mutant genlerin fonksiyonel analizi, kromatin yeniden şekillenmesini, Wnt/β-katenin ve JAK/STAT sinyalleşmesini, P53 hücre döngüsü yolunu, epigenetik değiştiricileri, oksidatif stres yolunu, PI3K/AKT/MTOR yolunu ve RAS/RAF/MAPK'yı ortaya çıkardı. kinaz yolu, HCC'nin onkogenezinde kritik bir rol oynar. 32,33 在一项检测到肿瘤相关突变的研究中,Huang 等人发现肿瘤相关突变依赖于ctDNA 的频率为19,5%,特异性为90% ,34 此外,经历血管侵犯的患者更有可能发生ctDNA突变(P=0.041)和更短的无复发生存期(P<0.001)。 32.33 在 一 项 检测 到 相关 的 研究 , huang 等 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 ctdna 的 为 为 %19.5 , 特异性 为 %90 .34 此外 经历 血管 侵犯 的 更 可能 发生 ctdna突变(P=0.041)和更短的无复发生存期(P<0,001)。32,33 Tümörle ilişkili mutasyonları bulan bir çalışmada, Huang ve ark.tümörle ilişkili mutasyonların %90 özgüllükle cDNA'ya %19.5 bağımlı olduğunu bulmuştur34. Ayrıca, vasküler invazyon geçirmiş hastaların cDNA geliştirme olasılığı daha yüksekti.мутация (P = 0,041) ve более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). mutasyon (P=0.041) ve daha kısa hastalıksız sağkalım (P<0.001).Diğer bir yaygın HCC sürücü geni, %30'un üzerinde bir mutasyon oranına sahip olan TP53'tür.Çalışmalar, kan ve idrardaki ctDNA'daki TP53 mutasyonlarının sıklığının %5 ile %60 arasında değiştiğini göstermiştir.35 Johan'ın çalışması, geç HCC'deki ctDNA mutasyon spektrumunun, TERT promotörü (%51), TP53 (%32), CTNNB1 (%17), PTEN (%8) dahil olmak üzere erken HCC'ye benzer bir mutasyon oranına sahip olduğunu gösterdi. AXIN1 ., ARID2, KMT2D ve TSC2 (her biri %6).36 β-katenin (CTNNB1) onkogeni, Wnt sinyal yolunda önemli bir rol oynar.Transkripsiyon koaktivatörü CTNNB1, hücre proliferasyonuna, apoptoz inhibisyonuna ve anjiyogeneze yol açabilen gen ekspresyonunu destekleyebilir.CTNNB1, hepatosit dönüşümünü indüklemek için TERT ile de etkileşime girebilir.33 TERT promotörü, bazı solid tümörlerde sıklıkla mutasyona uğrar.HCC'nin malign transformasyonundaki en erken genetik değişikliklerden biri olan TERT'deki değişiklikler, sirotik hepatositlerde telomeraz reaktivasyonuna yol açabilir ve proliferasyonu teşvik edebilir ve yaşlanmayı önleyebilir.33-37 TERT promotöründeki mutasyonların, proliferatif karaciğer nodülleri ve erken HCC'si olan hastaların %59-90'ında meydana geldiği ve hayatta kalma ile ilişkili olduğu bildirilmiştir.38
Kopya sayısı değişiklikleri (CNA), somatik mutasyonların önemli bir alt tipidir.Araştırmalar, CNA'nın yaygın ve odak yükünün, bazı kanser türlerinde tümör immün infiltrasyonunu ve dışlanmasını öngörebilen genomik bir imza olduğunu göstermiştir.39 Aktif infiltrasyon sinyali, yüksek sitolitik aktivite, şiddetli inflamasyon ve HCC'de antijen sunumu ile ilişkili genetik belirteçler.477 denekte tek nükleotid polimorfizmlerinin veri dizisinin analizi, CNS üzerinde düşük bir yük ortaya çıkardı.Buna karşılık, yüksek kapsamlı CNA yüküne sahip kromozomal olarak kararsız tümörler, bağışıklık reddi belirtileri gösterdi ve çoğalma, DNA onarımı ve TP53 işlev bozukluğu ile ilişkilendirildi.Xu et al.HCC grubunun kronik karaciğer hastalığı grubundan daha yüksek CNA skorlarına sahip olduğunu gösterdi.40 Tek bir hücrenin tam genom dizilimi kullanılarak, CNA'ların hepatokarsinogenezde erken ortaya çıktığı ve tümör ilerlemesi sırasında nispeten stabil kaldığı bulundu.41 Chung ve ark.HCC hastalarında cfDNA seviyelerinin önemli ölçüde yükseldiğini ve cfDNA'daki genom çapında CNA'ların sorafenib ile tedavi edilen HCC hastalarında önemli bir bağımsız prognostik belirteç olduğunu buldu.42 CNA yükü daha yüksek olan hastalarda hastalık ilerlemesi ve ölüm olasılığı, CNA yükü daha düşük olanlara göre daha yüksekti.Ollerich et al.kopya sayısı kararsızlık indeksinin (CNI) kanser hastalarının cfDNA'sındaki CNA'yı değerlendirmek için kullanılabileceğini buldu.İlerlemiş kanserli hastaların, sistemik kemoterapi ve immünoterapiye hasta yanıtını değerlendiren bir kontrol grubuna göre önemli ölçüde daha yüksek CNI skorlarına sahip olduğunu belirtmişlerdir.43 Bu sonuçlar, sıvı biyopsi örneklerinde bulunan CNA'ların ilerlemiş kanserli hastalarda prognostik göstergeler olarak hizmet edebileceğini göstermektedir.Sistemik tedavinin arka planında HCC.
Şu anda, ctDNA'yı tespit etmek için kullanılan yöntemler, hedeflenen ve hedeflenmeyen yöntemlere ayrılabilir.Kısaca dijital polimeraz zincir reaksiyonu (dPCR), BEAMing dijital PCR, Amplifikasyon Refrakter Mutasyon Sistemi-PCR, Capp-Seq ve Tam-Seq gibi hedefe yönelik yöntemler, önceden tanımlanmış genlere karşı oldukça hassastır.Tüm genom dizilimi ve NGS gibi hedef dışı yöntemler, tüm genomik peyzajın kapsamlı bir görünümünü sağlar.44 Hedef panellerle karşılaştırıldığında, tüm genom dizilimi yalnızca nokta mutasyonlarını ve eklemeleri değil, aynı zamanda yeniden düzenlemeleri ve kopya sayısı varyasyonlarını da saptayabilir.prognoz ve CTC ve cfDNA, HCC'nin dinamik izlenmesi için kullanılabilecek iyi göstergelerdir.45 Ek olarak, cfDNA analizi HCC'nin saptanmasında daha faydalı olabilir.Yan et al.HCC'li hastaların plazmasındaki cfDNA'nın, karaciğer fibrozisi olan hastalardan ve sağlıklı kontrollerden anlamlı derecede yüksek olduğunu gösterdi.AFP ile karşılaştırıldığında, ctDNA'nın erken HCC için daha iyi bir tarama belirteci olması bekleniyor.46 Bir popülasyon popülasyonunda cfDNA ve proteini test eden 47 sıvı biyopsinin prospektif bir çalışmasında, bunların HCC'li hastaları HCC'si olmayan hastalardan ayırt etmede etkili oldukları gösterilmiştir.331 ultrason normal ve AFP negatif hastanın takibinde, cfDNA'nın HCC teşhisi için duyarlılığı ve özgüllüğü sırasıyla %100 ve %94 idi, bu nedenle cDNA, asemptomatik HBsAg seropozitif bireylerde HCC'yi saptayabilir.Yeo48 çalışmasında, HCC'li hastalarda RASSF1A promotörünün yüksek oranda (%92,5) hipermetilasyonu bulunmuştur.Ayrıca, Xu ve ark.sırasıyla %90.5 ve %83.3 özgüllük ve duyarlılığa sahip spesifik metilasyon belirteçlerinden oluşan bir panel kullanarak HCC'yi tahmin etmek için bir tanı modeli oluşturdu.Panel, HCC'li hastaların AFP'den daha iyi olan diğer karaciğer hastalıkları olan hastalardan ayırt edilmesini sağlar.Ayrıca, testi pozitif çıkan normal kontrollerin, HBV enfeksiyonu veya alkol kullanım öyküsü gibi HCC için risk faktörlerine sahip olabileceğini bulmuşlardır.25 HCC için yüksek risk faktörlerinin, daha sonra HCC'nin ilerlemesine katkıda bulunan cfDNA'nın hipermetilasyonunu destekleyebileceğini ve dolayısıyla cfDNA'nın yüksek risk gruplarının taranmasında önemli bir rol oynayabileceğini varsayıyoruz.Cai et al.ctDNA mutasyonlarının tamamını özetler ve hastalarda tümör yükünü değerlendirmek için sağlam bir strateji sunar.49 Bu strateji, tümörijenezi görüntüleme değişikliğinden medyan 4.6 ay önce tanımlayabilir ve serum biyobelirteçleri AFP, AFP-L3 ve PIVKA-II ile karşılaştırıldığında üstün tanısal performans göstermiştir.Görüntü değerlendirmesi mevcut olmadığında cDNA testinin tanısal değeri gösterilmiştir, bu nedenle cDNA testi yüksek risk gruplarında erken HCC tanısında değerlidir.Son zamanlarda, bilim adamları 3204 klinik örnekte ve cfDNA'da çok değişkenli genetik varyasyonun (5-hidroksimetilsitozin, 5′-motif, parçalanma, nükleozom izi, HIFI dahil) göstergelerini analiz etmek için NGS teknolojisini kullandılar.Üç bağımsız tren, test ve test setine sahip yeniden doğrulanmış 50 HIFI modeli, HCC'ye özgü test ve test setlerinde sırasıyla %95.79 ve %95.42 hassasiyetle HCC ve HCC olmayan popülasyonlar arasında istikrarlı ve güvenilir bir ayrım göstermiştir.Cinsiyetler sırasıyla %95,00 ve %97,83 idi.HIFI yönteminin tanısal değeri, HCC'yi sirozdan ayırmada AFP'den daha yüksektir.Ayrıca cerrahi tedavide ctDNA da kullanılmaktadır.Atsushi et al.HCC'li hastalarda ameliyat öncesi ctDNA serum seviyelerini belirlemiş ve cDNA pozitif grupta nüks oranı ile ekstrahepatik metastaz oranının cDNA negatif gruba göre anlamlı derecede yüksek olduğunu ve cDNA seviyelerinin anlamlı şekilde korele olduğunu bulmuştur.tümör ilerlemesi ile;51 Oldukça hassas bir biyobelirteç olan ctDNA, HCC'nin damarları istila etme yeteneğini tahmin edebilir.Wang et al.HCC'li 46 hastanın tüm genom dizilimini gerçekleştirdi ve çok değişkenli analiz, mikrodamarlara invazyon için cDNA varyantının alel frekansının eşik değerinin %0.83, duyarlılığın %89.7 ve özgüllüğün %80.0 olduğunu gösterdi.cDNA'nın optimal tedaviyi yönlendirmeye yardımcı olabileceğini düşündüren, rezektabl HCC'de mikrovasküler invazyon için bağımsız bir risk faktörüdür.Sonuç olarak, ctDNA, HCC'nin oluşumu ve gelişiminde tam olarak rol oynar ve erken tarama, cerrahi değerlendirme ve hastalık izleme için kullanılabilir.
CTC'ler, kan dolaşımına metastaz yapan birincil tümörlerden veya metastazlardan türetilen malign hücrelerdir.Tümör hücreleri, bazal membranı parçalayan ve tümör hücrelerinin doğrudan kan ve lenf damarlarına girmesine izin veren matris metalloproteinazları (MMP'ler) salgılar.Bununla birlikte, çoğu CTC, anoikis, bağışıklık saldırısı veya kesme gerilimi ile hızla elimine edilir.53 Epitelyal-mezenkimal geçiş (EMT), CTC'lerin birincil tümör dokusundan kolayca izole edilmesine, kılcal damarları istila etmesine ve önemli ölçüde iyileştirilmiş hayatta kalma, metastaz, istila ve ilaç direnci elde etmesine izin verir.Çalışmalar, primer metastatik tümörlerde çeşitli tümör hücreleri arasında derin bir heterojenlik olduğunu göstermiştir.Bu nedenle, CTC analizi, tümör hücresi heterojenitesinin kapsamlı bir şekilde anlaşılmasına yol açabilir.54
HCC ile ilişkili CTC'ler için spesifik belirteçler, glipikan-3 (GPC3), asialoglikoprotein reseptörü (ASGPR), epitelyal hücre yapışma molekülü (EpCAM) ve CD44, CD90, 55 ve hücreler arası yapışma molekülü 1 (ICAM1) gibi kök hücre ile ilişkili belirteçleri içerir.) .56 GPC3 markörü, HCC'nin patolojik analizi ve karakterizasyonu için klinik olarak kullanılan bir hücre zarı bağlantılı proteindir.57 GPC3 ekspresyonu, orta ve düşük farklılaşmaya sahip HCC tümör hücrelerinde daha yaygındır ve ekstrahepatik göçü destekler;ek olarak, GPC3+ CTC'lerin varlığı metastatik HCC'yi gösterir.58 ASGPR, yalnızca hepatositlerin yüzeyinde eksprese edilen bir transmembran proteindir ve iyi diferansiye HCC'de yüksek oranda eksprese edilir.EpCAM, CTC'leri yakalamak için en yaygın olarak kullanılan membranla ilişkili proteinlerden biridir.EpCAM, Barselona Hastanesinde (BCLC) vasküler invazyon, değerlendirilen AFP seviyeleri ve ileri evre karaciğer kanseri gibi HCC'nin çeşitli klinikopatolojik özellikleri ile korelasyon gösteren kök hücre özelliklerine59 sahip HCC hücrelerinin bir yüzey belirteci olarak tanımlanmıştır.60 CTC EMT fenotipi oldukça metastatiktir.54 CTC'deki EMT süreçleri HCC metastazını destekler.Vimentin, büküm, E-box çinko parmak bağlama (ZEB) 1, ZEB2, salyangoz, sümüklü böcek ve E-cadherin gibi EMT belirteçlerinin ekspresyonu, HCC hastalarından alınan karaciğer kaynaklı CTC'lerde incelenmiştir.58 Cheng [61] tarafından geliştirilen CanPatrol™ sistemi, CTC'leri ağırlıklı olarak ifade edilen belirteçlere dayalı olarak üç fenotipik alt gruba ayırdı: epitelyal fenotip (EpCAM, CK8/18/19), mezenkimal fenotip (vimentin, sarmal) ve karışık fenotipler.176 hastada, toplam CTC, HCC'yi iyi huylu karaciğer hastalığından ayırmada AFP'den üstündü.Toplam CTC, AFP ve birleşik toplam CTC ve AFP için AUC değerleri 0.774 (%95 GA, 0.704-0.834), 0.669 (%95 GA, 0.587-0.750) ve 0.821 (%95 GA, 0.756-0.886) idi. ).), sırasıyla.EMT'ye dayalı CTC sınıflandırması, HCC teşhisini, erken nüksü, metastazı ve daha kısa toplam süreyi öngörebilir.
Şu anda, CSC'leri tespit etme yöntemleri arasında fiziksel yöntemler ve biyolojik yöntemler yer almaktadır.Genellikle biyofiziksel özelliklere dayalı zenginleştirme olarak adlandırılan fiziksel yöntemler, esas olarak CSC'nin boyut, yoğunluk, yük, hareketlilik ve deforme olabilirlik gibi fiziksel özelliklerine bağlıdır.Fiziksel özelliklerine bağlı olarak, filtrasyon tabanlı sistemler, dielektroforez vb. gibi çeşitli yöntemler vardır. İmmün afiniteye dayalı zenginleştirme olarak da bilinen ikincisi, yöntem tümöre özgü biyobelirteçlere karşı antikorlar kullandığından, esas olarak antijen-antikor bağlanmasına dayanır. EpCAM, ASGPR, insan epidermal büyüme faktörü reseptörü 2 (HER2), prostat spesifik antijen (PSA), insan pansitokeratin (P-CK) ve karbamoil fosfat sentaz 1 (CPS1) gibi.62 Zenginleştirmesiz yöntem olarak adlandırılan başka bir tür, daha yüksek nükleer-sitoplazmik oran ve boyuta dayalı olarak CTC'leri lökositlerden ayırt etmek için akış sitometrisini kullanır.Şu anda, CTC'lerin tespiti için FDA onaylı tek test, EpCAM hücre yüzeyi işaretleyicisini kullanan Cell-Search™ sistemidir. Bununla birlikte, kombine belirteçlere dayalı CTC tespiti, pozitiflik oranını artırabilir.54 ASGPR ve CPS1'e karşı antikorların bir karışımı, HCC hastalarında %91'lik bir CTC tespit oranı elde etti.63 Zhang ve arkadaşları, ASGPR'ye karşı antikorları olan bir CTC-Chip kullandılar, P -CK ve CPS1 ve HCC hastalarını iyi huylu karaciğer hastalığı olan veya HCC olmayan kanserli hastalardan %100 oranında ayırt etti.64 Wang tarafından yapılan bir çalışma, 42 HCC hastasının %60'ında EpCAM+ CTC'leri tespit etti ve hem pozitiflik hem de pozitiflik arasında anlamlı korelasyonlar buldu. oranı ve TNM evresi olan CTC'lerin sayısı.65 Guo ve arkadaşları, AFP düzeyi <20 ng/mL olan 125/171 (%73) hastada CTC'den türetilen PCR skorunun %72,5'lik bir duyarlılık ve 20 ng/mL'lik bir hassasiyette AFP için %57,0 ve %90,0 ile karşılaştırıldığında %95,0 özgüllük.66 AFP ve CTC'lerin kombinasyonu HCC tespitini iyileştirebilir.45 Grupların erken taranmasında CTC'lerin AFP'ye göre bir avantajı olduğuna inanılmaktadır. HCC için yüksek risk altındadır. Bununla birlikte, kombine belirteçlere dayalı CTC tespiti, pozitiflik oranını artırabilir.54 ASGPR ve CPS1'e karşı antikorların bir karışımı, HCC hastalarında %91'lik bir CTC tespit oranı elde etti.63 Zhang ve arkadaşları, ASGPR'ye karşı antikorları olan bir CTC-Chip kullandılar, P -CK ve CPS1 ve HCC hastalarını iyi huylu karaciğer hastalığı olan veya HCC olmayan kanserli hastalardan %100 oranında ayırt etti.64 Wang tarafından yapılan bir çalışma, 42 HCC hastasının %60'ında EpCAM+ CTC'leri tespit etti ve hem pozitiflik hem de pozitiflik arasında anlamlı korelasyonlar buldu. oranı ve TNM evresi olan CTC'lerin sayısı.65 Guo ve arkadaşları, AFP düzeyi <20 ng/mL olan 125/171 (%73) hastada CTC'den türetilen PCR skorunun %72,5'lik bir duyarlılık ve 20 ng/mL'lik bir hassasiyette AFP için %57,0 ve %90,0 ile karşılaştırıldığında %95,0 özgüllük.66 AFP ve CTC'lerin kombinasyonu HCC tespitini iyileştirebilir.45 Grupların erken taranmasında CTC'lerin AFP'ye göre bir avantajı olduğuna inanılmaktadır. HCC için yüksek risk altındadır.Bununla birlikte, CTC'lerin marker bazlı kombine tespiti, pozitif sonuçların yüzdesini artırabilir.54 Anti-ASGPR ve CPS1 antikorlarının bir karışımı, HCC'li hastalarda %91'lik bir CTC tespit oranı elde etti.63 Zhang ve ark.ASGPR, P-CK ve CPS1'e karşı antikorları olan bir CTC-Chip kullanmış ve ayrıca HCC'li hastaları benign karaciğer hastalığı olan veya HCC olmayan hastalardan %100 oranında ayırmıştır.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге групп. TNM evreli CTC'lerin sıklığı ve sayısı.65 Guo ve arkadaşları, AFP düzeyleri <20 ng/mL olan 125/171 (%73) hastada CTC'lerden türetilen PCR'nin %72.5'lik bir duyarlılık ve 20 ng/mL'lik bir kesme seviyesinde AFP için %57,0 ve %90,0'a kıyasla %95,0.66 AFP ve CTC'lerin kombinasyonu HCC'nin saptanmasını iyileştirebilir.45 CTC'lerin erken taramada AFP'ye göre bir avantajı olduğu kabul edilir gruplar.HCC riski yüksek.Bununla birlikte, CTC'lerin işaretleyici tabanlı birleşik tespiti, pozitif sonuçların yüzdesini artırabilir.54 Anti-ASGPR ve CPS1 antikorlarının bir karışımı, HCC'li hastalarda %91'lik bir CTC saptama oranı elde etti.63 Zhang ve ark.ASGPR, P-CK ve CPS1'e karşı antikorları olan CTC çipleri kullandı ve HCC hastalarını %100 ile benign karaciğer hastalığından ve HCC olmayan hastalardan ayırdı.64 Wang'ın çalışması, 42 HCC hastasında EpCAM+ CTC'lerin %60'ını tanımladı ve TNM aşamasında insidans ile CTC sayısı arasında anlamlı bir ilişki buldu. 65 Guo 等人发现,在AFP 水平<20 ng/mL 的125/171 (%73) 名患者中,CTC 衍生的PCR 评分升高,敏感性为%72,5,特异性为%95.0,而AFP 在截止值为20 ng/mL 时的特异性为57,0% 和%90,0。 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (%73) 名 患者 , , ctc 衍生 pcr 评分 , 敏感性 为 为 %72.5, 为 %95,0, AFP 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值为20ng/mL 时的特异性为57.0% 和90.0。65 Guo ve ark.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 нг/мл. AFP düzeyleri <20 ng/mL olan 125/171 (%73) hastada, CTC'den türetilen PCR değerlerinin %72,5 duyarlılık ve %95,0 özgüllükle yükseldiğini, AFP'nin ise kesme özgüllüğünde olduğunu buldu. 20 ng/mL idi.ml %57.0 ve %90.0 idi.66 ORP ve CTC kombinasyonu, HCC'nin saptanmasını iyileştirir.45 CTC'lerin, yüksek riskli HCC popülasyonlarının erken taranmasında AFP'den üstün olduğu düşünülmektedir.Bu nedenle, CTC pozitif ve yüksek riskli HCC grupları için, CTC testi rutin olarak ultrason ve AFP tespiti ile birleştirilmelidir.Bununla birlikte, CTC'ler, tümör metastazı ve nüksünün önemli belirleyicileri olarak kabul edilir ve CTC'lerin saptanması, bir tanı aracı olarak bağımsız olarak önerilmez.62 Bu nedenle, CTC, şu anda kullanılan diğer belirteçlerden daha iyi bir öngörücü biyobelirteç olarak hizmet edebilir. Zhou ve arkadaşları, yüksek sayıda EpCAM+ CTC'si ve düzenleyici T hücresi olan hastaların, düşük sayıda CTC'si olanlara göre HCC nüksü geliştirme riskinin daha yüksek olduğunu ve nüks oranının %66.7'ye karşı %10.3 olduğunu buldu (P < 0.001).67 Benzer bir çalışma Zhong ve arkadaşları tarafından rapor edilmiştir.68 Ayrıca, Qi, erken evre hastalığı olanlar da dahil olmak üzere HCC'li 112 hastanın 101'inin (%90.81) CTC'ler için pozitif olduğunu ve 3 sonra çok küçük HCC nodüllerinin tespit edildiğini bulmuştur. 5 aya kadar takip. Zhou ve arkadaşları, yüksek sayıda EpCAM+ CTC'si ve düzenleyici T hücresi olan hastaların, düşük sayıda CTC'si olanlara göre HCC nüksü geliştirme riskinin daha yüksek olduğunu ve nüks oranının %66.7'ye karşı %10.3 olduğunu buldu (P < 0.001).67 A benzer bir çalışma Zhong ve ark. tarafından rapor edilmiştir.68 Ek olarak, Qi, erken evre hastalığı olanlar da dahil olmak üzere HCC'li 112 hastanın 101'inin (%90.81) CTC'ler için pozitif olduğunu ve 3 ila 3 ila 10 dakika sonra çok küçük HCC nodüllerinin saptandığını bulmuştur. 5 aylık takip. Чжоу и др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou ve arkadaşları, yüksek EpCAM+ CTC'leri ve düzenleyici T hücreleri olan hastaların, düşük CTC'leri olanlardan daha yüksek bir HCC nüksü riskine sahip olduğunu bulmuşlardır, nüks oranı %66.7'ye karşı %10.3 (P<0.001)67.Benzer bir çalışma Zhong ve ark.68. Ayrıca Qi, erken hastalığı olanlar da dahil olmak üzere HCC'li 112 hastadan 101'inin (%90.81) CTC'ye sahip olduğunu ve 3 ila 5 aylık takipten sonra çok küçük HCC nodüllerinin tespit edildiğini buldu. Zhou 等人发现,与CTC 数量较少的患者相比,EpCAM+ CTC 和调节性T 细胞数量升高的患者发生HCC 复发的风险更高,复发率分别为%66,7 和%10,3 (P < 0,001)。 Zhou 等 人 发现 与 ct ctc 数量 少 的 患者 , epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 更 , 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 %10.3 p <0.001)。。。。。。。。。。。。。。。 Чжоу и др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Zhou et al.yüksek EpCAM+ CTC'leri ve düzenleyici T hücreleri olan hastaların, daha az CTC'si olan hastalarla karşılaştırıldığında, sırasıyla %66,7 ve %10,3 nüks oranlarıyla daha yüksek HCC nüksü riskine sahip olduğunu buldu (P < 0,001).Benzer bir çalışma Zhong ve ark.68 Ek olarak, Qi, erken hastalığı olanlar da dahil olmak üzere 112 HCC hastasının 101'inin (%90.81) pozitif CTC sonuçlarına sahip olduğunu ve 3 ziyaretten sonra çok küçük HCC nodülleri bulduğunu saptadı.5 aya kadar gözlem.Ayrıca kronik HBV enfeksiyonu olan 12 hastada CTC'ler buldular ve 2 CTC pozitif hastada 5 ay içinde küçük HCC tümörleri buldular.69 Bu nedenle, CTC'ler HCC'yi tahmin etmek için kullanılabilir, 70 ancak öngörücü biyobelirteçler olarak daha rutin olarak kullanılabilirler.
cfDNA gibi, cfRNA da çeşitli sistemler aracılığıyla kan dolaşımına salınır.Periferik kandaki bu moleküller, köken aldığı kanserli dokuyu temsil eder.İnvaziv olmayan yöntemlerle tespit edilen belirteçlerle karşılaştırıldığında, cfRNA'lar daha dinamik olarak düzenlenir, dokuya özgüdür ve hücre dışı ortamda bol miktarda bulunur.71 miRNA'nın (miRNA'ların) HCC'deki önemi ve tanı değeri birçok çalışmada rapor edilmiştir.miRNA'lar, hedef haberci RNA'ların (mRNA'lar) translasyonunu inhibe ederek çeşitli moleküler biyolojik aktiviteleri düzenleyen endojen kodlamayan RNA'lardır (ncRNA'lar).miRNA'lar eksozomlarda kapsüllenmiş apoptotik cisimlerde bulunur, ancak aynı zamanda periferik kandaki serum proteinlerine ve lipitlere stabil bir şekilde bağlanabilir ve HCC'yi değerlendirmek için kullanılabilir.mikroRNA'lar karaciğer rejenerasyonu, lipid metabolizması, apoptoz, inflamasyon ve HCC gelişiminde rol oynar.72 miR-21, miR-155 ve miR-221 gibi onkojenik miRNA'lar HCC'de iyi bilinmektedir.Özellikle miR-21, hücre dışı matriste ve fibrozda kolajen sentezinde önemli bir rol oynar ve hematopoietik kök hücreleri aktive ederek hepatokarsinogenezi destekler.72,73 HCC'deki tümör baskılayıcı miRNA'lar, miRNA-122, miRNA-29, Let-7 ailesi ve miRNA-15 ailesini içerir.Let-7 ailesi, RAS ailesini hedef alan birçok tümör baskılayıcı miRNA'dan oluşur.miR-15 ailesi, belirli mRNA'lar için tamamlayıcı dizilere sahip olan miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 ve miR-497'yi içerir.Ek olarak, uzun kodlamayan RNA'lar (lncRNA'lar) ve dairesel RNA'lar (cirRNA'lar) da HCC'nin erken taranması için önemlidir.lncRNA'lar, mRNA benzeri ncRNA'lar dahil olmak üzere en geniş ncRNA sınıfını temsil eder ve birçok insan hastalığının patogenezinde yer alır.LncRNA'lar karaciğer mikroçevresinde ve kronik karaciğer hastalığında düzenleyici bir rol oynar.74 CircRNA'lar aynı zamanda gen ekspresyonunun düzenlenmesinde çoklu fonksiyonlara sahip bir ncRNA sınıfıdır.Son zamanlarda, circRNA'lar HCC için teşhis araçları olarak kabul edildi.
Dolaşan serbest RNA, standart RNA saflaştırma yöntemleri kullanılarak fnRNA'nın periferik kandan izolasyonunu daha az zahmetli hale getiren sıcaklığa, pH'a ve RNaz'a direnç dahil olmak üzere dikkate değer bir stabiliteye sahiptir.En sık kullanılan yöntemler arasında NGS, mikrodizi ve RT-qPCR bulunur.NGS, mikroRNA'ların genom boyunca ölçülmesine izin verir.Ancak bu yöntem pahalıdır ve analiz standardize edilmemiştir.Buna karşılık, RT-qPCR ucuzdur, nükleik asitleri hızla çoğaltır ve daha yüksek hassasiyet, daha yüksek doğruluk, daha geniş dinamik aralık ve daha az numune gerektirmesi gibi birçok avantaj sunar.Mikrodiziler, tamamlayıcı DNA probları ile hedef miRNA'ların hassas ve spesifik hibridizasyonuna dayanan miRNA tespiti için kullanılan başka bir yöntemdir,75 ancak mikrodizi verilerinin analizi zaman alıcıdır.
Dolaşımdaki miR-122 ve Let-7'nin, yüksek risk gruplarında erken evre HCC'nin, HBV ile ilişkili premalign nodülleri olan hastalarda belirteçlerin ve erken evre HCC'nin teşhis edilmesinde potansiyel olarak yararlı olduğu bildirilmiştir.76 Cai ve ark.Let-7 ailesinin üyelerinin (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 ve miR-199a/b) kronik risk altında olduğunu buldu. Hepatitli hastalarda HCC.Let-7 ailesi, kronik hepatit C ile ilişkili yüksek risk gruplarında HCC gelişimini tahmin etmek için etkili bir vekil biyobelirteç olarak hizmet edebilir. 77 miR-122, karaciğer sirozu olan hastalarda erken HCC'yi saptamada yüksek tanısal doğruluğa sahiptir.78 Serum dolaşan MiR-107, HCC'nin erken evrelerinde de değerlendirilmiştir, 79 ve yüksek riskli popülasyonlarda iyi bir potansiyel göstermiştir.Zhou ve arkadaşları, bir miRNA panelinin (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a ve miR-801) HCC'yi kronik hepatit B'den (CHB) ve sirozdan ayırt edebileceğini bildirdi. duyarlılık sırasıyla %79.1 ve %75 ve özgüllük %76.4 ve %91.1 idi.80 HBV ile ilişkili HCC'de, HCC'si olmayan kronik HBV hastalarına kıyasla miR150 düzeylerinin önemli ölçüde azaldığını bulduk (duyarlılık %79,1, özgüllük %76,5).Sağlıklı kontrollere kıyasla HCC'de -224 yükselmiştir ve alt grup analizleri, HBV ile ilişkili HCC'li hastalarda daha yüksek seviyeler göstermiştir.hepatit B ile ilişkili siroz ve HCC hastaları, farklı kontrollerde HCC'yi tespit edebilen yedi farklı şekilde eksprese edilmiş siRNA içeren bir siRNA sınıflandırıcı tanımladı;Erken taramadaki AUC aralığı, AFP gönüllülerinden daha iyidir.Dört miRNA'nın (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p ve miR-365a-3p) HCC'li hastaları HCC'si olmayan hastalardan ayırt edebildiğini bulmuşlardır.Aşırı eksprese eden beş miRNA (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p ve miR-148a-3p), özellikle HCC, siroz ve CHB biyobelirteçlerinde potansiyel HBV enfeksiyonları olarak kabul edilir. miR-34a-5p karaciğer sirozu için biyobelirteçler olabilir85 ve yüksek riskli popülasyonlarda HCC'nin erken taranması için potansiyel biyobelirteçler olabilir.HCC'de en çok çalışılan lncRNA, karaciğer kanserinde (HULC) oldukça aktiftir.Diğer çalışmalar, HCC hastalarında dolaşan HULC'nin, sağlıklı bireylere kıyasla HCC hastalarında bu lncRNA'nın yüksek oranda düzenlenmesi nedeniyle tanısal bir belirteç olarak kullanılabileceğini göstermiştir.71,86 Diğer lnRNA'lar arasında LINC00152, yüksek AUC'si, duyarlılığı ve özgüllüğü nedeniyle en iyi tanısal lncRNA olarak kabul edilir.86 Bir çalışmada, LINC00152'nin periferik kan ekspresyonu, normal sağlıklı kontrollerden KHB ve sirozlu hastalara kademeli olarak arttı ve son olarak HCC'de en yüksekti.HCC'li hastaların plazmasında circSMARCA5 ekspresyonuna ilişkin çalışmalar, hepatitten siroz ve prekanseröz lezyonlara kadar değişen HCC ekspresyonunda ilerleyici bir düşüş göstermiştir.87 ROC eğrilerinin analizi, bu circRNA'ların hepatit veya karaciğer sirozu olan hastaları HCC'li hastalardan, özellikle de AFP seviyeleri 200 ng/mL'nin altında olanlardan ayırt etme potansiyelini doğruladı.Ek olarak, Zhu, HBV ile ilişkili HCC hastalarından alınan plazma örneklerinde 13.617 siklik RNA'yı analiz etti ve 6 siklik RNA'nın HCC ve HBV ile ilişkili sirozda farklı şekilde eksprese edildiğini doğruladı, bu da cRNA'ların faydalı olabileceğini düşündürdü.karaciğer hastalığı, skleroz hastaları ile ilişkili olanlar gibi yüksek risk gruplarının erken taranması için belirteçler.88
Eksozomlar, çapı 40-160 nm olan zar vezikülleridir;çoklu hücre içi veziküller hücre zarı ile birleşir ve hücre dışı matrise salınır.Lipidler, proteinler, RNA ve DNA dahil olmak üzere birçok aktif bileşen içerirler ve hem HCC hem de HCC olmayan hücreler olmak üzere hücreler arasındaki iletişimde önemli bir rol oynarlar.89,90 Eksozomlar, hepatosit fibroblastlarını ve yıldız hücrelerini, bağışıklık hücrelerini, normal hepatositleri ve HCC hücrelerini aktive ederek HCC'nin ilerlemesini düzenler.91 Tümör mikroçevresinde, tümör hücreleri, kanser hücrelerinden olgunlaşmamış hücrelere taşınan çok sayıda eksozom üretir ve bunlar da onkogenez, bozulma ve hücresel sinyalleşmeye katılır.92 Çalışmalar, eksozomların, tümör invazyonu ve metastaz mekanizmalarından biri olabilecek patolojik süreçler sırasında onkogenleri normal hücrelere aktarabildiğini göstermiştir.93 Eksozomların kanser ilerlemesindeki rolü dinamik ve kanser tipine özgü olabilir, 89 Eksozomlar, hücreler arası iletişim iyonlarında ve hücresel mikro-ortam etkileşimlerinde yer alabilen alıcı hücrelerdeki çoklu hedef genleri düzenlemek için bitişik veya uzak hücreler tarafından içselleştirilebilir. hücresel sinyalleşme ve metabolizmaya aracılık eder.94 Eksozom kargo moleküllerinin özellikleri ve dinamik değişiklikleri, ana tümör hücrelerinin özelliklerini ve dinamik değişikliklerini doğrudan yansıtır95, bu aynı zamanda eksozomların kanserin teşhisinde ve prognozunda kullanımının yanı sıra antikanser tedavisine bireysel yanıtı tahmin etmek için de temel oluşturur. ..96
Eksozomları izole etmek ve analiz etmek için geleneksel laboratuvar yöntemleri, ultrasantrifüj, filtrasyon, boyut dışlama kromatografisi, immün afinite saflaştırması, Western blot, enzim bağlantılı immünosorbent tahlili (ELISA), PCR ve akış analizi dahil olmak üzere karmaşık, çok adımlı ve zaman alıcıdır.mikro/nanoteknoloji kullanan minyatür sistemler ve çip üzerinde laboratuvar platformları, eksozomların hızlı ve uygun yerinde izolasyonu için yaygın olarak geliştirilmektedir.Nanoparçacık izleme analizi (NTA), manyetik nanoparçacıklar ve polihidroksialkanoatlar gibi yöntemler de dahil olmak üzere eksozomların boyutunu ve konsantrasyonunu karakterize etmek için yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir.Mikroakışkan ve elektrokimyasal yöntemler de yüksek verimlerde eksozomları hızla tespit edebilir.
Eksozomal proteinler HCC tanısı için önemli belirteçlerdir.Arbelaiz çalışmasında, 98 RasGAP SH3 bağlayıcı protein (G3BP) ve polimerik immünoglobulin reseptörünün (PIGR) seviyesi, HCC'den türetilen eksozomlarda önemli ölçüde yükselmiştir ve iki proteinin varsayılan birleşik etkinliği, AFP'ninkinden daha üstündür.Demir yüklenmesi HCC gelişimine katkıda bulunan önemli bir faktördür.Tseng, hepsidin'in HCC'ye dirençte önemli bir rol oynayabileceğini bildirdi.99 HCC hastalarının serumlarından türetilen eksozomlar, sağlıklı emsallerine göre önemli ölçüde daha yüksek kopya sayısı hepsidin mRNA varyantına sahipti, bu da hepsidinin HCC için yeni bir tanısal biyobelirteç olabileceğini düşündürmektedir.100 HCC tarafından üretilen eksozomlardaki 14-3-3ζ proteini, T hücresi aktivasyonunu, proliferasyonunu ve farklılaşmasını azaltabilir ve T hücresinin düzenleyici T hücrelerine dönüşümünü indükleyebilir, bu da T hücresi tükenmesine neden olabilir.101 Bu, HCC tümörijenezine katkıda bulunabilecek immün sürveyanstan 102 tümör kaçışını araştıran birkaç çalışma tarafından desteklenmektedir.
Plazma veya serumda ecRNA'nın varlığına ek olarak, RNA ile zenginleştirilmiş eksozomlar, erken tümör taramasında invaziv olmayan gerçek zamanlı evreleme için ve tümör evrimini ve tedaviye yanıtı belirlemek için kullanılabilir.HCC grubunda kan serumunda eksozomal miRNA-21 düzeyi KHB grubuna göre 2.21 kat, HCC grubunda sağlıklı popülasyona göre 5.57 kat daha yüksekti.Wang çalışmasında, eksozomlar, EAA değerleri 0,83 (%95 CI 0,74–0,93) ve 0,94 (%95 CI 0,88–1.00) olan sirotik hastalarla karşılaştırıldığında HCC'yi önemli ölçüde artırdı.104 Elde edilen veriler, onkogenez ve HCC ilerlemesinin düzenlenmesinde spesifik eksozomal kargo moleküllerinin katılımını aydınlatmıştır.105 miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 ve miR-26a'nın serum ifadesi tutarlıdır.ve metastaz ve miR21 seviyeleri, HCC hastalarında sağlıklı kontrollere ve ayrıca KHB hastalarına göre çok daha yüksekti.102 LncRNA, HCC'de potansiyel tanısal değere sahipti.Çalışmalar, HCC hastalarının serumlarından türetilen eksozomların, HCC'siz hastalara kıyasla büyüme faktörü-β'yi dönüştürerek aktive edilen LINC00161, LINC000635 ve lncRNA'nın önemli ölçüde daha yüksek seviyelerine sahip olduğunu ve bu lncRNA'ların TNM evresi ve tümör hacmi ile güçlü bir şekilde ilişkili olduğunu göstermiştir.110 Conigliaro ve ark.CD90+ eksozomlarının, vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) salınımını ve VEGF-R1 reseptörü üretimini önemli ölçüde artıran, böylece anjiyogenezi uyaran yüksek seviyelerde lncRNAH19 ifade ettiği bulundu.93 CircRNA'lar başka bir eksozomal ncRNA türüdür - türler arasında daha düşük ancak stabil seviyelerde ifade edilir, circRNA'lar ayrıca hücre tipi, doku tipi, gelişim aşaması ve düzenleyici aktivite için spesifiklik gösterir.111 circRNA, erken ve minimal invaziv kanser için tanısal biyobelirteçlerdir.112 Yakın zamanda yapılan klinik deneyler, bireysel miRNA'ların HCC'yi tahmin etmedeki özgünlüğünün ideal olmadığını göstermiştir.Bu nedenle, çoklu tahliller (örneğin, AFP ile kombinasyon halinde miR-122 ve miR-48a) kullanılarak karmaşık saptama, erken HCC'nin tanımlanmasını ve HCC'nin sirozdan ayırt edilmesini iyileştirebilir.100
KHB ve karaciğer sirozu olan hastalar, HCC gelişimi için en yaygın yüksek risk grubudur.Yüksek risk grupları için, sürekli bir virolojik yanıt elde edildiğinde, HCC riskine dayalı maliyet etkin bir sürveyans stratejisi geliştirilmelidir ve erken tarama, yüksek maliyet etkinlik oranıyla HCC tanı ve tedavisini iyileştirmenin anahtarıdır2. ..Kanser için erken tarama yöntemlerinin birçok sınırlaması vardır: çoğu kanser türü için etkili erken tarama yöntemleri geliştirilmemiştir ve uyum genellikle düşüktür.Geleneksel erken tarama yöntemleriyle karşılaştırıldığında, sıvı biyopsi teknolojisinin bariz avantajları vardır: örnekleme kolaylığı, panrac tespiti, iyi örnek tekrarlanabilirliği ve tümör heterojenliğine etkili yanıt.Sıvı biyopsi ile ilişkili yöntemlerin maliyet etkinliği göz önüne alındığında, bunların HCC taramasında kullanımları rutin olarak test edilmemiştir.Moleküler düzeyde doğru saptamadaki gelişmelere rağmen, sıvı biyopsisi, hedef hastalarda HCC'yi saptamak için maliyetlidir ve ultrason ve manyetik rezonans görüntüleme gibi belirli görüntüleme prosedürlerine kıyasla yaygın kullanımını sınırlar.113,114 Bununla birlikte, önceki bir çalışma, sıvı biyopsinin kaliteye göre ayarlanmış yaşam yılları (QALY'ler) açısından önemli bir fayda gösterdiğini göstermiştir.115 Mide ve nazofarenksin erken karsinomunda sıvı biyopsinin faydaları da gösterilmiştir.116,117 Mevcut görüş, sıvı biyopsinin tümörlerin saptanması ve teşhisinde serum biyobelirteçlerini ve radyolojik taramayı tamamlayabileceği yönündedir.117 118
Güncel literatüre göre, sıvı biyopsi teknolojisi, karaciğer kanseri için yüksek risk gruplarının erken taranmasında önemli ölçüde daha yüksek duyarlılık ve özgüllük göstermiştir.Sıvı biyopsisinin türünden bağımsız olarak, HCC'yi HCC'si olmayan yüksek riskli bireylerden ayırt edebilir, bu da yüksek riskli ve sağlıklı bireyler arasındaki farklar belirgin olduğundan erken taramanın önemini ortaya koyar.ctDNA'nın yarı ömrü kısadır ve HCC'yi tespit etmek için kullanılabilir, bu nedenle tümör kaynaklı cDNA'daki herhangi bir değişiklik, özellikle küçük tümörler için, gerçek zamanlı somut tümör ilerlemesi kanıtı sağlayabilir.Yüksek bir ctDNA seviyesi, kanserin gelişimini ve yayılmasını gösterir ve ilerleme ve nüksün erken bir göstergesidir.Ayrıca ctDNA sonuçlarına göre hastalar bireyselleştirilmiş tedavi ve takip alabilmektedir.119 Spesifik metilasyon bölgeleri, HCC ve sirotik nodüllerin erken teşhisi için AFP'den daha iyi bir belirteç olabilir.Rezektabl HCC vakalarında, yüksek cDNA seviyeleri mikrovasküler invazyon ve postoperatif nüks ve metastazın göstergesidir.Kopya sayısındaki değişiklikler, HCC'li hastaların sağkalımı ile ilişkilidir.cDNA değerlendirmesinin HCC'nin genel tedavisine dahil olabileceği ve cDNA'nın terapötik modülasyonun etkili bir göstergesi olarak hizmet edebileceği varsayılabilir.ctDNA'daki spesifik genetik mutasyonlara dayanan belirteçler, etkinliği tahmin etmek ve ilaç direncini izlemek için klinik kılavuzlar tarafından benimsenmiştir.ctDNA testi, erken tarama için en faydalı sıvı biyopsi aracı olabilir.CTC'ler ayrıca yüksek riskli HCC gruplarının erken taranmasında önemli bir rol oynar.HCC ile ilişkili CTC'lerin çeşitli belirteçleri, HCC'nin başlangıcı, gelişimi ve nüksetmesinde özellikle önemlidir.Membran vezikülleri olarak, eksozomlar, özellikle HCC hücrelerinde, hücreler arası iletişimde yer alır.Dolaşan mikroRNA'lar kanda stabildir ve bu nedenle HCC'nin erken taranması için daha faydalı olabilir.Yavaş yavaş, eksozomal proteinler ve RNA açısından zengin eksozomlar keşfedildi ve bunların HCC için öngörücü etkinlikleri doğrulandı.İlginç bir şekilde, farklı HCC etiyolojileri de farklı mutasyonlarla ilişkilendirilebilir, bu nedenle erken tarama için farklı HCC etiyolojilerine dayalı olarak farklı biyobelirteçler seçebiliriz.120
Bununla birlikte, mevcut sıvı biyopsi teknikleri stabilite açısından sorgulanabilir ve HCC'nin erken taramasını veya izlenmesini bağımsız olarak gerçekleştiremez, ancak yine de bireysel tarama ve tanıyı tamamlayabilir.121 Bir sıvı biyopsi şekli olarak, ctDNA, CTC, cfRNA ve eksozomla ilişkili AFP veya PIVKA-II'nin saptanması ve görüntülenmesi, HCC'nin erken tanı ve prognozunda umut verici uygulamalara sahiptir.Bununla birlikte, kana ctDNA salımının kesin mekanizması açıklığa kavuşturulmamıştır.ctDNA'nın temel biyolojik özelliklerinin ortaya çıkarılması, bir belirteç olarak kullanımını kolaylaştırabilir.Dolaşımdaki az miktarda ctDNA ve katı numune işleme gereksinimleri, HCC'de cDNA tespitinin klinik uygulaması için zorluklardır.Ek olarak, genetik mutasyonlar, kanserojenlerin doğru tanımlanmasına izin veren spesifik özelliklere sahip değildir.Normal dokularda da çoklu genetik ve somatik varyantlar mevcut olduğundan, sıvı biyopsisi ile tanımlanan genetik mutasyonlar, HCC için erken taramada sınırlı fayda sağlayabilir.122 cDNA'yı tümör olmayan DNA'dan ayırt etmeye yardımcı olan iyi tanımlanmış faydalı gen hedeflerinin ve biyobelirteçlerin sınırlamaları, cDNA kullanımındaki en önemli konulardır.CTC'lerin tespiti için hassas ve spesifik belirteçlerin kullanışlılığının olmaması.Yalnızca metastatik potansiyeli olan canlı hücreler bulundu ve CSC ile zenginleştirilmiş işaretlerin optimal kombinasyonu belirsizdi.Kültür için CTC'lerin izolasyonu ve mutasyon profillerinin değerlendirilmesi de zorlu bir iştir.Eksozomların tanımlanması, izolasyonu ve saflaştırılmasıyla ilgili problemler nedeniyle, spesifik moleküler mekanizma hala belirsizdir ve eksozomların ve HCC'nin mekanizması ile ilgili önceki çalışmalar ve miRNA'ların, lncRNA'ların ve proteinlerin eksozomlara ayrılma şekli derinlemesine yapılmamıştır. ve eksozom alımının belirli bir tip süreç olup olmadığı açık değildir.HCC'nin tanı ve tedavisi için eksozomların kullanımı hala klinik öncesi aşamadadır.Kan toplamak için kullanılan tüplerin türü, kan hacmi, numune saklama ve saptama, izolasyon ve zenginleştirme gibi sıvı biyopsi prosedürlerinin standardizasyonunun olmaması, tıp merkezlerindeki uygulamalardaki farklılıklar nedeniyle rutin klinik uygulamada kullanımlarını engelleyebilir.Sıvı biyopsinin erken tarama, tanı, etkinlik değerlendirmesi ve HCC'nin öngörülmesindeki etkinliği, özellikle yüksek risk grupları için keşfedilmeyi beklemektedir.Likit biyopsi teknolojisi büyük bir potansiyele sahiptir ve yakın gelecekte karaciğer kanserinin klinik pratiğinde yaygın olarak kullanılması beklenmektedir.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL ve diğerleri.Küresel Kanser İstatistikleri 2020: GLOBOCAN, 185 ülkede 36 kanser türünün insidansını ve mortalitesini tahmin ediyor.CA Kanser J Kliniği.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Ulusal Sağlık Komisyonu Genel Merkezi.Primer karaciğer kanserinin tanı ve tedavisi için kriterler (2022 baskısı) [J].Klinik Karaciğer Hastalıkları Dergisi, 2022, 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z, et al.Hepatosellüler karsinomun tanı ve tedavisi için kılavuzlar (2019 baskısı).Karaciğer kanseri.2020;9(6):682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K, et al.Hepatoselüler karsinom için klinik uygulama kılavuzları: Japon Karaciğer Hastalıkları Derneği, 2017 (JSH-HCC 4. kılavuzlar), 2019 güncellemesi.Karaciğer Hastalığı Rezervuarı.2019;49(10)::1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Kronik karaciğer hastalığında sıvı biyopsi.Anne Hepato.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Sıvı meme kanseri biyopsisi: odaklanmış bir inceleme.Arch Pathol Lab Med.2021;145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Hepatosellüler karsinom için sürveyans: mevcut en iyi uygulamalar ve gelecekteki yönler.Gastroenteroloji.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. Avrupa Araştırma Derneği L, Avrupa Organizasyonu R, C Terapötikler.Klinik kılavuzlar EASL-EORTC: hepatoselüler karsinomun tedavisi.J Heparin.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK ve diğerleri.Küçük hepatoselüler karsinomda yararlı serolojik belirteçler olarak AFP ve HCCR-1'in birleşik analizi: ileriye dönük bir kohort çalışması.İşaretsiz.2012;32(4):265-271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S, et al.Hepatit B virüsü ile ilişkili karaciğer hastalığında plazma microRNA-125b'nin farklı ekspresyonu ve hepatit B virüsünün neden olduğu hepatoselüler karsinomun tanısal potansiyeli.Karaciğer hastalığı rezervuarı.2017;47(4):312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. ve diğerleri.Hepatosellüler karsinomda alfa-fetoproteinin biyolojisi ve önemi.Karaciğer int.2019;39(12):2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N, et al.Asya-Pasifik bölgesinde hepatosellüler karsinomun tedavisi için klinik kılavuzlar: 2017 güncellemesi.Uluslararası Karaciğer Hastalıkları Örgütü.2017;11(4):317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei ve diğerleri.Hepatosellüler karsinomalı Çinli hastalarda serum PIVKA-II'nin tek başına veya AFP ile kombinasyon halinde tanı değeri.İşaretsiz.2021;2021:8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.Küçük hücreli dışı akciğer kanseri plazma dışı hümoral sıvı biyopsisi: tümöre daha yakın!hücre.2020;9(11).doi: 10.3390/hücreler9112486
15. Mader S, Pantel K. Sıvı biyopsisi: mevcut durum ve geleceğe yönelik beklentiler.Tedavi Onkol Arş.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P, et al.Sıvı bazlı kanser biyopsisi: klinik onkolojide çok modlu bir tanı aracı.Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. İnsan plazmasındaki nükleik asitler.CR Seances Soc Biol Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et al.Parça boyutu analizi ile dolaşımdaki tümör DNA'sının gelişmiş tespiti.Bilim tıbbı tercüme eder.2018;10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Dolaşan tümör DNA parçası uzunluğu.PLOS genleri.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. Dolaşan tümör DNA'sı: sıvı bazlı kanser biyopsisinde umut verici bir biyobelirteç.hedef tümör.2016;7(30):48832-48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ ve diğerleri.İnsan malignitelerinin erken ve geç evrelerinde dolaşan tümör DNA'sının tespiti.Bilim tıbbı tercüme eder.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Katı kanserin mutasyonel öngörücü analizi için sıvı biyopsi: bir patoloğun bakış açısı.J Biyoteknoloji.2019;297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.Dolaşımdaki plazma DNA taramasıyla erken tümör tespiti: heyecan mı yoksa umut mu?Belçika klinik hukuku.2020;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. İnsan hepatokarsinogenezinde hepatit virüsü ve yaşlanmanın DNA metilasyonu üzerindeki etkisi.Histopatoloji.2010;25(5):647-654.doi: 10.14670/HH-25.647


Gönderim zamanı: Eylül-23-2022